资源类型:
期刊
Pubmed体系:
English Abstract;Journal Article
收录情况:
◇ 统计源期刊
◇ 北大核心
◇ CSCD-C
文章类型:
论著
机构:
[1]宁夏医科大学总医院医学科学研究院
[2]宁夏医科大学总医院病理科
[3]宁夏医科大学总医院急诊科
[4]银川市第一人民医院耳鼻喉科
[5]宁夏医科大学总医院肿瘤内二科
出处:
Journal Of Sichuan University(Medical Science Edition).2024,55(5):1138-1149.
ISSN:
1672-173X
关键词:
脆性X智力障碍蛋白
DEAD box RNA解旋酶-5
上皮-间质转化
Wnt/β-catenin信号通路
摘要:
目的 探讨脆性X智力障碍蛋白(fragile X mental retardation protein, FMRP)促进乳腺癌细胞迁移、上皮-间质转化(epithelial mesenchymal transition, EMT)发生及其可能的作用机制。方法 采用RT-PCR、Western blot方法,分析FMRP在正常乳腺上皮细胞(MCF-10A)和4种乳腺癌细胞系(MCF-7、BT474、MDA-MB-231、HCC1937)中mRNA和蛋白表达,免疫组化染色检测FMRP在乳腺癌组织中的表达;GEO数据库分析FMRP基因在乳腺癌中的表达及与临床预后的关系;采用慢病毒感染和siRNA干扰技术分别构建FMRP过表达及干扰载体,转染人乳腺癌细胞系MCF-7,设置对照组(Control)、干扰空载体组(NC)、敲低载体组(si FMRP)以及过表达空载体组(Lv-NC)、过表达载体组(Lv-FMRP);划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,Western blot检测各组细胞中EMT标志物[上皮标志物E-cadherin,间质标志物N-cadherin、vimentin、ZEB1(zinc finger E-box binding homeobox 1)、Slug(snail family zinc finger 2)]表达;免疫共沉淀联合质谱分析(IP-MS)验证FMRP与DEAD box RNA解旋酶-5(DEAD-box helicase5, DDX5)蛋白的互作关系,利用蛋白合成抑制剂放线菌酮(cycloheximide, CHX)、蛋白酶体抑制剂MG132检测FMRP对DDX5蛋白表达的调控作用;同时转染si DDX5载体,观察DDX5是否可以逆转FMRP过表达对细胞迁移、EMT的影响;采用免疫荧光染色检测β-catenin的定位及表达,Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路核心标志物蛋白表达。结果 FMRP在乳腺癌组织及细胞中呈高表达(P<0.05),FMRP高表达组总生存和无进展生存低于FMRP低表达组(P<0.05);敲低FMRP后MCF-7细胞迁移能力减弱,过表达FMRP促进细胞迁移(P<0.05);敲低FMRP后E-cadherin表达升高,N-cadherin、vimentin、ZEB1、Slug表达降低,抑制EMT发生,而过表达FMRP则促进EMT进程(P<0.05);FMRP与DDX5蛋白互作,且通过阻断泛素-蛋白酶体途径促进DDX5蛋白稳定性;敲低DDX5逆转FMRP过表达对细胞迁移及EMT的促进作用(P<0.05),且有效抑制β-catenin核转位,降低β-catenin核分布;进一步发现DDX5下调后p-β-catenin、GSK3β、Axin2蛋白表达升高,C-myc蛋白表达降低(P<0.05),而联合FMRP过表达逆转上述蛋白的表达(P<0.05)。结论 FMRP靶向DDX5通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进乳腺癌细胞迁移和EMT进程。
基金:
宁夏回族自治区重点研发计划项目(No.2022BEG03124); 宁夏医科大学2023年校级项目(No.XM2023023)资助
PubmedID:
39507961
第一作者:
曹佳
第一作者机构:
[1]宁夏医科大学总医院医学科学研究院
通讯作者:
王南
推荐引用方式(GB/T 7714):
曹佳,王晶,石斌,等.脆性X智力障碍蛋白靶向DDX5调控Wnt/β-catenin信号通路促进乳腺癌细胞上皮-间质转化发生[J].Journal Of Sichuan University(Medical Science Edition).2024,55(5):1138-1149.