目的:构建以Survivin为肿瘤抗原,GM-CSF为基因佐剂的融合基因,并将该融合基因转入DC,研究DC疫苗抗肿瘤治疗的新方法.方法:参照GenBank收载的Survivin基因序列设计引物,提取HT-29肿瘤细胞中的mRNA,经RT-PCR反应获得野生型Survivin cDNA基因片段.人工合成GM-CSF、Survivin两端和中间连接接头引物.PCR反应获得GM-CSF、Survivin DNA片段.经BamHⅠ酶切,T4DNA连接酶连接获得GM-CSF-Survlvin融合DNA.以此DNA为模板,用两端引物作PCR扩增以获得较纯的融合DNA片段.经EcoRⅠ、HindⅢ双酶切后与相同双酶切的pcDNA3.1(-)载体质粒混合,加入T4DNA连接酶,16℃连接20h.用连接物转化大肠杆菌DHSα,挑选克隆提取质粒.结果:经PCR和限制性内切酶酶切初步鉴定后,选取一株送样作DNA序列测定,结果与设计序列完全一致.质粒定名为pcGM-Sur,用jetPEITM-Macrophage转染体系,将构建的pcGM-Sur质粒转染DC.采用RT-PCR和Western blot检测到DC中的融合基因mRNA和表达的Survivin抗原.结论:质粒pcGM-Sur DNA序列与设计完全一致,转染DC后能转录出完整的融合基因mRNA并表达出具有Survivin抗原性的融合蛋白.