资源类型:
期刊
Pubmed体系:
English Abstract;Journal Article;Research Support, Non-U.S. Gov't
收录情况:
◇ 统计源期刊
◇ 北大核心
◇ CSCD-C
文章类型:
机构:
[1]四川大学华西医院消化外科研究室
四川大学华西医院
[2]四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室
四川大学华西医院
出处:
Journal of Biomedical Engineering.2010,27(2):400-6.
ISSN:
1001-5515
关键词:
过氧化物酶体增殖因子活化受体δ
结直肠癌
RNA干扰
慢病毒
KM12C
摘要:
摘要:大肠癌是常见的恶性肿瘤,其发病率和病死率正逐年递增。过氧化物酶体增殖因子活化受体δ(peroxisome pro1iferator-activated receptorδ,PPARδ)是结肠腺瘤性息肉基因通路的下游靶标,很可能参与了大肠癌发病机制。然而,目前对该基因在大肠癌中的功能尚未阐明。本实验采用慢病毒三质粒包装系统构建特异靶向人PPARδ基因的RNA干扰(RNAinterference,RNAi)慢病毒载体,用以建立PPARδ基因稳定沉默的结肠癌细胞株。测序证实,成功构建编码表达PPARδ短发夹结构RNA(sh-PPARδ)的慢病毒载体pLVshPPARδ以及对照载体pLVControl。病毒载体转导结肠癌细胞株KM12C后,荧光显微镜及流式细胞术(fluorescence-activated cell sorting,FACS)证实细胞转染效率>90%,RT-PCR测定实验组KM12C细胞PPARδ的mRNA表达比未处理细胞下降70%,对照组与未处理细胞无显著差异。Western blot显示实验组PPARδ蛋白表达量比未处理细胞明显下降,对照组与未处理细胞无显著差异。结果显示成功构建特异靶向人PPARδ基因的RNAi慢病毒载体,并成功建立PPARδ表达稳定干扰的人结肠癌细胞株KM12C,为PPARδ在大肠癌中的功能研究提供了新的细胞模型。
基金:
国家自然科学基金资助项目(30801332); 中国博士后科学基金资助项目(20070421149); 教育部重点项目资助(106132)
PubmedID:
20481327
第一作者:
蒋小
第一作者机构:
[1]四川大学华西医院消化外科研究室
通讯作者:
周总光
通讯机构:
[1]四川大学华西医院消化外科研究室
[2]四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室
推荐引用方式(GB/T 7714):
蒋小,杨烈,周总光,等.PPARδ基因RNA干扰慢病毒载体的构建及稳定干扰结肠癌细胞株KM12C的建立[J].Journal of Biomedical Engineering.2010,27(2):400-6.