摘要：
目的 探讨泛素特异性蛋白酶41(USP41)作为乳腺癌新型诊断/预后标志物的潜在价值,并观察USP41对乳腺癌细胞恶性生物学行为的影响.方法 分别从癌症基因组图谱(TCGA)数据库、基因表达综合(GEO)数据库的GSE96058数据集中获取1 086例乳腺癌样本、3273例乳腺癌样本的转录组数据及临床信息,利用R4.1.2分别进行基因表达分析、预后分析、功能富集分析及免疫浸润分析.分别用两种特异性小干扰RNA(siRNA)转染乳腺癌细胞系MCF-7,蛋白质印迹法(Western blot)实验检测转染前后USP41蛋白表达水平,集落形成实验、细胞计数试剂盒(CCK-8)实验、划痕实验及Transwell实验检测转染后乳腺癌细胞增殖、侵袭与迁移能力并与对照组作比较.Cox回归用于比较预后差异,相对灰度值的比较由单因素方差分析和Tukey HSD事后检验完成,细胞集落数的比较由Welch方差分析和Games-Howell事后检验完成,同一时间下光密度值和相对宽度的比较由两因素重复测量数据方差分析和多重成对比较完成,细胞迁移数的比较由Kruskal-Wallis检验和Dunn事后检验完成,单因素和多因素Cox回归用于确定预后独立危险因素,采用Spearman分析进行相关性分析.结果 USP41在10种癌症组织中高表达,作为乳腺癌诊断标志物的诊断效能一般(曲线下面积为0.717).USP41高表达与乳腺癌患者更差的总生存期[P＜0.01,风险比(HR)=1.93,95％可信区间(CI):1.40～2.66]和无病生存期相关(P＜0.01,HR=2.10,95％CI:1.37～3.23).Cox回归分析表明USP41是乳腺癌的独立危险因素(P＜0.01,HR=1.406,95％CI:1.13～1.75).基因集富集分析表明USP41高表达与多巴胺能的神经形成、多巴胺神经递质释放循环及胰岛素摄取等功能活动相关.免疫浸润分析表明USP41高表达与更丰富的免疫细胞浸润和多种免疫检查点表达呈明显正相关.siRNA1组和siRNA2组USP41蛋白表达水平(3.88±0.27、4.13±0.12)均显著低于对照组(6.03±0.40),差异有统计学意义(F=194.405,P＜0.01).siRNA1组和siRNA2 组细胞集落数[(20.75±6.13)、(25.50±8.89)个]均显著低于对照组[(76.75±17.23)个],差异有统计学意义(F=16.720,P＜0.01).siRNA1 组和 siRNA2 组 24 h 吸光度值(0.43±0.01、0.44±0.01)均显著低于对照组(0.51±0.04),差异有统计学意义(F=11.933,P＜0.05).siRNA1组和siRNA2组24 h侵袭宽度(2.53±0.12、2.67±0.12)均显著高于对照组(1.70±0.10),差异有统计学意义(F=67.364,P＜0.01).siRNA1组24 h迁移细胞数[(190.50±19.09)个]显著低于对照组[(351.25±15.88)个],差异有统计学意义(F=-2.755,P＜0.05).结论 USP41高表达与乳腺癌不良预后相关并促进细胞恶性生物学行为.
