背景与目的 肺癌组织的免疫微环境已成为关注的重点，随着多色流式的兴起，流式检测肺癌免疫 微环境成为重要的手段，但多为检测细胞亚群占比或主要细胞亚群功能，无法同时对两者进行检测。因此本研究 建立了一种可靠的21色流式方案，以检测人非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）肿瘤组织中免疫细胞 各亚群。方法 选用细胞膜表面抗体细胞分化簇（cluster of differentiation, CD）45、CD3、CD19、CD4、CD8、程序 性死亡受体1（programmed cell death 1, PD-1）、CD39、CD103、CD25、CD127、趋化因子受体8（chemokine receptor 8, CCR8）、CD56、CD11c、人类白细胞抗原（human leukocyte antigen, HLA）-DR、CD38、CD27、CD69、CD62L、 CD45■、CCR7和核酸染料L/D制定方案。首先对各抗体进行抗体滴定实验、电压优化、减一色染色和单色染色实 验，确定各实验条件及检测方案后，采用6例健康成年志愿者外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells, PBMCs）标本验证方案的可行性；检测分析6例NSCLC患者的肿瘤组织样本。结果 采用建立的21色流式方案检测了 6例NSCLC患者的肿瘤组织样本，可分析出肺癌组织中各细胞亚群的占比及主要细胞群的免疫表型和分化情况。结 论 成功建立的21色流式方案适用于PBMCs和NSCLC组织样本检测，为监测肺癌中免疫微环境状态提供了一种有效 的新思路。