摘要：
目的 吲哚胺2,3-双加氧酶(indoleamine 2,3 dioxygenase,IDO)是色氨酸代谢过程中的限速酶,近年来研究发现,IDO高表达是急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞介导免疫耐受的重要机制,因此研究如何调控IDO表达,将有可能为AML治疗提供新的辅助方法.本实验拟从分子生物及蛋白质水平,探讨胸腺肽α1(thymosin-α1,Tα1)调节AML细胞株IDO表达及改善T细胞的免疫抑制作用,为AML免疫治疗提供理论依据.方法 采用逆转录-聚合酶联反应(RT-PCR)检测γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、Tα1对HL60/K562细胞株IDO mRNA表达的影响;采用蛋白质印迹法检测IFNγ和Tα1对HL 60/K562细胞株IDO蛋白表达的影响;采用MTT检测Td1和1甲基色氨酸(1-methyl-tryptophan,1-MT)作用后经IFN-γ诱导的HL-60/K562细胞对植物血凝素(phytohaermagglutinin,PHA)刺激T细胞增殖抑制作用.结果 HL-60/K562细胞株均表达IDO mRNA;IFN γ作用后,IDO mRNA表达明显增加(HL-60细胞株t=130.19,K562细胞株t=67.38,均P＜0.05);IFN γ+Tα1共同作用后,明显下调IDO mRNA表达(HL 60细胞株F=132.55,K562细胞株F=77.36,均P＜0.05),并呈浓度依赖性(HL 60细胞株r=0.71,K562细胞株r=0.80);HL-60/K562细胞株低水平表达IDO蛋白;经IFNγ作用后,HL-60细胞株IDO蛋白表达水平为2.505 6±0.019 6,明显高于空白对照组0.189 7±0.083 4,t=326.79,P＜0.05;K562细胞株IDO蛋白表达水平为0.988 8±0.023 9,明显高于空白对照组0.253 6±0.016 3,t=76.12,P＜0.05;IFN-γ+Tα1共同作用后,经IFN-γ+Tα1共同作用后,IDO蛋白在HL 60细胞株各组的表达水平分别为2.455 0±0.066 1、1.526 0±0.017 3、1.134 1±0.060 1、0.806 0±0.029 7和0.070 0±0.003 6,并呈浓度依赖性,F=4 187.76,r=0.77,P＜0.05;经IFN-γ+Tα1共同作用后,IDO蛋白在K562细胞株各组的表达水平分别为0.998 6±0.016 4、0.784 3±0.014 9、0.714 5±0.009 5、0.656 6±0.007 6和0.492 2±0.010 9,并呈浓度依赖性,F=59.50,r=-0.76,P＜0.05.IFN γ诱导的HL-60/K562细胞可抑制PHA刺激的T细胞增殖(P＜0.05),并呈浓度依赖性(HL-60细胞株r—0.99,K562细胞株r—0.98);1-MT组和Tα1组中HL 60/K562细胞株对T细胞增殖的抑制率明显低于对照组,差异有统计学意义,P＜0.05.结论 IDO可能在AML诱导机体产生免疫耐受过程中起重要作用,Tα1可下调AML细胞IDO表达,改善AML细胞对T细胞的免疫抑制作用.
